大肠杆菌用酶底物法步骤如下：

1. 采集微生物样品时，采样瓶不得用样品洗涤，采集样品于灭 菌的采样瓶中。

2. 从龙头装置采集样品时，不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至很大，放水3～5min，然后将龙头关闭，用火焰灼烧约3min灭 菌或用70%～75%的酒精对龙头进行消毒，开足龙头，再放水1min，以充分除去水管中的滞留杂质。

3. 采样时控制水流速度，小心接入瓶内。

4. 采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭 菌过的专用采样装置采样。

5. 在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰。

6. 如果采集的是含有活性氯的样品，需在采样瓶灭 菌前加入硫代硫酸钠溶液（6.4），以除去活性氯对细 菌的抑制作用（每125ml容积加入0.1ml的硫代硫酸钠溶液）；如果采集的是重金属离子含量较高的样品，则在采样瓶灭 菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.5），以消 除干扰（每125ml容积加入0.3ml的乙二胺四乙酸二钠溶液）。

7. 注：15.7mg硫代硫酸钠（6.2）可去除样品中1.5mg活性氯，硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯量调整。