一、酶底物（英语：substrate）在生物化学领域指参与生化反应的物质，可为化学元素、分子或化合物，经酶作用可形成产物，一个生化反应的底物往往同时也是另一个化学反应的产物。

1、酶是一种有催化功能的蛋白质。

2、底物就是能和特异的酶结合的物质。

3、当酶结合其特异底物时，在适当条件下，就会被催化转变为其它物质。

二、检测用途：

酶底物法测定用途：用于检测水中总大肠菌群粪大肠菌群（耐热大肠菌群）和大肠埃希氏菌。可用于检测水的类型：饮用水、水源水、废水、食品水、地表水、地下水、海水、瓶装水、中水、二次供水、管网水、畜牧用水、医疗用水等。

三、检测原理：

酶底物法采用 ONPG 和 MUG 两种营养指示剂，这两种试剂分别可以被大肠菌群的 β-半乳糖苷酶和大肠杆菌的 β-葡糖醛酸酶分解代谢。当大肠菌群在酶底物检测试剂中生长时，其使用 β-半乳糖苷酶分解代谢 ONPG，并使样品从无色变为黄色。大肠杆菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代谢 MUG 时，能够发出荧光。